大家好，今天小热点关注到一个比较有意思的话题，就是关于pcr技术步骤的问题，于是小编就整理了3个相关介绍pcr技术步骤的解答，让我们一起看看吧。

PCR流程的四个步骤？

PCR反应程序指的是：PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：

1、模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；

2、模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

3、延伸：DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。

此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。

该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。

传统的Taq估计合成1000bp大概需要1分钟、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。有修正功能的则会比较慢。

　1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA 　　

2.退火（复性）（40℃-65℃）：系统温度降低,引物与 DNA模板结合,形成局部双链.　　

3.延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活 性）的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′ 端延 伸,合成与模板互补的DNA链.　每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量既增加一倍.　现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度.

pcr技术五个步骤？

pcr的五个步骤分别是：

1、预变性，

2、变性，

3、退火，

4、延伸，

5、彻底延伸。

一般步骤一的时间根据试剂说明书中的说明设置时间，主要是模板的变性和taq酶的激活是，该步只有起始时一步，2、3、4三个步骤是一个循环，一般qpcr中是设置35-40个循环。第五步彻底是在2、3、4步骤的循环数跑完后进行，一般是5min。

pcr技术原理及步骤？

一、PCR技术基本原理有：

1、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

2、PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：

①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；

②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

二、PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。

扩展资料：

1、PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12）量级的起始待测模板扩增到微克（μg=-6）水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位）；在细菌学中最小检出率为3个细菌。

2、PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。

到此结束，以上就是小编对于pcr技术步骤的问题就介绍到这了，希望介绍关于pcr技术步骤的3点解答对大家有用。

郑重声明：本文版权归原作者所有，转载文章仅为传播更多信息之目的，如作者信息标记有误，请第一时间联系我们修改或删除，多谢。